熒光顯微鏡是利用樣品發(fā)出的熒光來獲取顯微圖像的一種顯微鏡。在熒光顯微鏡中,濾光片的作用是選擇性地透過激發(fā)光和熒光光之間的波長差異,以增強(qiáng)樣品的熒光信號(hào),并減少非特異性的背景熒光。
熒光顯微鏡濾光片通常由多個(gè)濾光片組成,每個(gè)濾光片都有特定的波長范圍和顏色。
下面是一些常見的熒光顯微鏡濾光片和它們的波長和顏色:
激發(fā)濾光片(excitation filter):這種濾光片選擇性地透過激發(fā)光的波長范圍,通常是藍(lán)色或紫色。它的作用是激發(fā)樣品中的熒光染料,使其產(chǎn)生熒光信號(hào)。激發(fā)濾光片的波長范圍通常在400-500 nm之間,可以選擇性地傳遞特定波長的光線用于激發(fā)樣品中的熒光染料。常見的激發(fā)濾光片包括藍(lán)色濾光片(波長約為470納米)和綠色濾光片(波長約為546納米)。
二向色鏡(dichroic mirror):這種濾光片選擇性地反射激發(fā)光的波長,同時(shí)透過樣品發(fā)出的熒光光信號(hào)。二向色鏡濾光片的波長范圍通常在500-550 nm之間。
發(fā)射濾光片(emission filter):這種濾光片選擇性地透過樣品發(fā)出的熒光光信號(hào),同時(shí)阻擋非特異性的背景熒光。發(fā)射濾光片的波長范圍取決于所使用的熒光染料。
有些熒光顯微鏡還配有衰減片,衰減濾光片可以控制激發(fā)光線的強(qiáng)度。它們通常與激發(fā)濾光片一起使用,以確保樣品接收到適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)光強(qiáng)度。衰減濾光片的顏色通常與激發(fā)濾光片的顏色相同。
通過合理的組合和選擇,熒光顯微鏡濾光片可以實(shí)現(xiàn)高靈敏度和高分辨率的成像,同時(shí)減少背景干擾和雜散信號(hào),熒光濾光片的波長和顏色通常與熒光染料的發(fā)射波長和顏色相對(duì)應(yīng)。常見的熒光濾光片包括藍(lán)色濾光片(波長約為450nm)、綠色濾光片(波長約為510nm)和紅色濾光片(波長約為600nm)。